Современные персонажи:

Дезмонд Майлс — главный герой всей серии игры, ассасин, бывший бармен, потомок Эцио.
Люси Стиллман — ассассин, обучает Дезмонда навыкам ассасина.[убита]
Ребекка Крейн — инженер, построила и улучшила Анимус 2.0.
Шон Гастингс — историк, наводит Дезмонду сведения о персонажах, неуклюжий и нервный циник.
Уоррен Видик — учёный, тренер убийц Абстерго.

Исторические персонажи:

Эцио Аудиторе да Фиренце — главный ассассин возглавивший "Братство Ассассинов".[занят]
Марио Аудиторе — дядя Эцио, ассасин.[убит]
Клаудия Аудиторе — сестра Эцио, ассасин.
Мария Аудиторе — мать Эцио.
Кристина Веспуччи — возлюбленная Эцио, появляется в воспоминаниях Эцио о ней.
Ла Вольпе — друг Эцио, профессиональный вор, ассасин.
Николо Макиавелли — друг Эцио, наставник ассасинов.
Бартоломео д'Альвиано — друг Эцио, воин, ассассин.
Пантасилея Бальони — жена Бартоломео.
Леонардо Да Винчи — друг Эцио, художник, изобретатель. Создал парашют для Эцио, а также вернул ему всё потерянное снаряжение.
Катерина Сфорца — графиня Форли, любовница Эцио, просит у наёмников помощи в обороне Форли.
Федерико Аудиторе — брат Эцио. Появляется в воспоминании о Кристине.[убит]
Вьери Пацци — сын банкира. Появляется в воспоминании Эцио о Кристине.[убит]
Салаи - ученик Леонардо Да Винчи
Эрколе Массимо - лидер герметистов
Георгий - Папа Римский 1512 года и главный тамплиер.
Роберто де Росси - сын Папы Римского и тамплиер.
Франческо де Ляви - лучший друг Папы Римского и полководец армии тамплиеров.